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| 无信号-阴性结果 |
| 发布时间：2008-10-16 |
1. 真阴性结果：组织或细胞不表达抗原，无法检测到相关信号；或表达抗原太低，所使用检测系统不足以达到检测所需要的灵敏度。
2. 假阴性结果：
（1）染色前错误：切片时选错蜡块和选错切片，这种情况可用H&E染色验证。
（2）染色中错误：
① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、底物等。
② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否在足够高的温度条件下孵育了足够的时间。
③ 复查抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必须是抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。
④ 检查抗体的有效期和保存条件，尤其是标记了酶或荧光素的抗体。现在大多数试剂公司的抗体均要求在4~8℃条件下保存，应避免反复冻融，试剂保存时一定要避免与挥发性有机溶剂同放一室，以免降低抗体的效价。
⑤ 检查抗体稀释度及所使用的抗体稀释液是否合适。
⑥ 确定组织或细胞标本的储存条件。
⑦ 检查底物溶液，最简单的检测方法是将一滴标记有酶的抗体加入到制备好的底物溶液中，如果底物发生预期的颜色变化，则可排除底物的因素。需要注意的是，有些底物在制成工作液后应在一定时间内用完，否则会失效。
⑧ 检查冲洗液是否和反应试剂匹配，冲洗液的pH值也很重要，与过氧化物酶底物匹配的溶液中不应含有叠氮钠。
⑨ 检查复染剂、脱水、透明和封片剂是否和所使用的色原匹配。荧光素染色封片要选用水溶性封片剂， AEC, AP Red/Fast Red和其它水溶性染料不能用二甲苯有机溶剂透明。 |
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