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| 二步法（以EnVision，SuperPicture或 EliVision试剂盒为例） |
| 发布时间：2008-10-16 |
1. 石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS（pH7.4）冲洗，3分钟×3次。
2. 根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复处理。
3. 3％H2O2（现配现用）孵育10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
4. PBS冲洗，3分钟×3次；甩去PBS液，滴加适当比例稀释的一抗或即用型的一抗工作液，湿盒中室温下孵育60分钟或4℃过夜。
5. PBS冲洗，5分钟×3次；甩去PBS液, 滴加二抗、辣根过氧化物酶多聚体溶液(试剂盒提供)，室温孵育10~30分钟。
6. PBS冲洗，3分钟×3次；甩去PBS液,，滴加显色剂（DAB或AEC）显色；显色时间为5~10分钟，可在显微镜下观察显色情况。
7. 自来水冲洗，苏木素复染，0.1％盐酸酒精分化，0.1％氨水或PBS冲洗返蓝。
8. 如果DAB显色，则切片梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片；如果AEC显色，则切片不能酒精脱水，而直接用水溶性封片剂封片。 |
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